硅膠顆粒在高pH條件下的溶解問題
硅膠作為高效液相色譜柱的填料基質，盡管被廣泛采用，但其性能并非完美無缺，存在一些固有的缺陷。通常認為，當硅膠填料長時間持續暴露在pH>8的環境中，硅膠骨架可能會發生溶解，這種溶解現象會導致柱效顯著下降，峰形變差，保留時間縮短等問題，進而影響分析實驗的正常進行。
目前，關于硅膠填料在高pH條件下損壞的機理已有較為普遍的認識，如圖1所示，即氫氧根離子（OH－）攻擊硅膠骨架中的硅氧鍵，釋放出原硅酸。隨著硅膠顆粒基體的溶解，孔洞逐漸形成，這些孔洞的累積最終可能導致柱床的塌陷，從而嚴重影響色譜柱的性能。
圖1 硅膠骨架溶解過程
然而某些樣品的分析在堿性條件下具有更好的分離效果和分析效率，甚至某些化合物在堿性條件下才穩定，如何應對高pH條件下的色譜分析呢？
雜化硅膠顆粒解決高pH條件分析難題
為了克服純硅膠基質填料的局限性，華譜科儀研發團隊推出技術創新的雜化硅膠顆粒。這種雜化硅膠顆粒通過在硅氧骨架中引入亞乙基橋結構。該結構中Si-C鍵具有更高的化學穩定性，且完全釋放出一個亞乙基橋單元，需要破壞6個硅氧鍵，這使得雜化硅膠顆粒在高pH條件下具有更高的耐受性。
圖2 雜化硅膠骨架結構
華譜科儀研發團隊以最新研發的雜化顆粒為載體，結合特有的鍵合技術和表面修飾，隆重推出AlphaHybrid C18產品。該產品將pH耐受范圍拓寬至12，突破了反相色譜柱在高pH條件下的應用限制，為方法開發、分析檢測帶來新的選擇！
對AlphaHybrid C18耐堿性進行考察，AlphaHybrid C18在50 mM的三乙胺（pH=10）、柱溫50℃的條件下共經過300 h，柱效依然保持在80%以上。
圖3 AlphaHybrid C18耐堿性能測試
AlphaHybrid C18色譜柱應對堿性色譜條件分析案例
以下展示采用AlphaHybrid C18色譜柱在堿性流動相條件下測試的化藥案例，分別為：阿奇霉素、氯氮平和β受體阻斷劑。
案例一阿奇霉素有關物質分析
阿奇霉素目前中國藥典（ChP）、美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）均采用HPLC法進行有關物質的分析，其中ChP規定的流動相 pH 值為8.2，USP和EP規定的流動相 pH 值為8.9，這就要求實驗所用色譜柱需要具有良好的耐堿性能。
本實驗參照歐洲藥典（EP）方法，采用 AlphaHybrid C18, 4.6×250 mm, 5 μm色譜柱對阿奇霉素有關物質項下系統適用性及峰鑒別溶液進行分離，實現阿奇霉素和13種雜質的良好分離。
色譜條件
儀 器：華譜科儀S6000高效液相色譜儀；
色譜柱：AlphaHybrid C18, 4.6×250 mm, 5 μm；
流動相：A_1.8 g/L磷酸氫二鈉溶液（pH=8.9）,B_甲醇：乙腈=25：75；
流 速：1.0 mL/min；
進樣量：50 μL；
柱 溫：65℃；
檢測器：UV@210 nm；
梯 度：
實驗結果
圖4 阿奇霉素系統適用性溶液
表1 阿奇霉素系統適用性結果
圖5 阿奇霉素峰鑒別溶液
表2 阿奇霉素峰鑒別結果
案例二氯氮平及雜質分析
本實驗參照2020版《中國藥典》氯氮平有關物質的液相分析方法，采用AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5 μm色譜柱對氯氮平及四種氯氮平雜質進行分離分析，分離性能良好。
色譜條件
儀 器：華譜科儀S6000高效液相色譜儀；
色譜柱：AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5 μm；
流動相：甲醇：0.4%三乙胺-水=70：30；
流 速：1.0 mL/min；
進樣量：10 μL；
柱 溫：30 ℃；
檢測器：UV@257 nm.
實驗結果
（峰1_氯氮平雜質A；峰2_氯氮平雜質D；峰3_氯氮平雜質C；峰4_氯氮平；峰5_氯氮平雜質B；）
圖6 氯氮平測試結果色譜圖
表3氯氮平測試結果
案例三7種β受體阻斷劑分離
采用AlphaHybrid C18,4.6×150 mm,5 μm色譜柱，對包括索他洛爾、阿替洛爾、拉貝洛爾、吲哚洛爾、美托洛爾、比索洛爾、普萘洛爾在內的7種β受體阻斷劑進行分離測試，實現了良好分離。
色譜條件
儀 器：華譜科儀S6000高效液相色譜儀；
色譜柱：AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5 μm；
流動相：A：10 mM碳酸氫銨（pH=10.5）；B：乙腈；
流 速：1.0 mL/min;
進樣量：10 μL;
柱 溫：30 ℃;
檢測器：UV@230 nm;
梯 度：
實驗結果
峰1_索他洛爾；峰2_阿替洛爾；峰3_拉貝洛爾（非對映異構對）；峰4_吲哚洛爾；峰5_美托洛爾；峰6_比索洛爾；峰7_普萘洛爾；）
圖 7 β受體阻斷劑測試結果色譜圖
表4 β受體阻斷劑測試結果
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